任何曾經(jīng)作過細(xì)胞培養(yǎng)的人,都會遇到與污染有關(guān)的問題,污染的發(fā)源來自許多形式,它有可能是已感染的細(xì)胞,設(shè)備,藥劑,試管及由空氣傳播之細(xì)菌的結(jié)果,因?yàn)樗梢栽诓焕沫h(huán)境下造成惡性循環(huán),基于重要性,追蹤可能的污染源有兩個范圍,包含:一個是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的準(zhǔn)備工作,另一個是細(xì)胞培養(yǎng)處理的技術(shù)步驟。受污染的有機(jī)體一般有:細(xì)菌(bacteria),霉菌(fungi),酵母菌(yeasts),病毒(viruses),及霉?jié){體(mycoplasma)。通常,細(xì)菌污染透過與人直接接觸而發(fā)生,而霉菌污染極不易避免,一旦它們已經(jīng)污染實(shí)驗(yàn)桌或培養(yǎng)箱,霉菌形如長馬蹄狀及似綿羊毛狀的生長是可以用肉眼看見,霉菌通常透過空氣傳播,酵母菌也屬于霉菌類。

 

而透過病毒來污染似乎較不常見,原因可追溯于病毒對于超過37?C溫度的極敏感度。另一方面, 經(jīng)由霉?jié){體的細(xì)胞培養(yǎng)感染較常發(fā)生,它們持續(xù)較久及不易處理,然而,使用較先進(jìn)的方法,可以易于辨識它們。霉?jié){體異于細(xì)菌,因?yàn)?霉?jié){體分子更小,在0.22um至0.20um之間,沒有細(xì)胞壁及單細(xì)胞生殖,因?yàn)槊節(jié){體感染時不常產(chǎn)生劇烈影響,即使,它在各種狀況下,入侵至受感染的細(xì)胞的metabolism內(nèi),它可維持長時間不被發(fā)現(xiàn)。所以,霉?jié){體的感染源不易追蹤,因?yàn)?它會以新方式的  cell lines 引入實(shí)驗(yàn)室,即使,這血清產(chǎn)品制造者保證免于受到霉?jié){體的感染,但是,事實(shí)上,污染之血清仍是較有可能的原因。胰蛋白也是感染源之一,因?yàn)橐鹊鞍资怯韶i的胰臟產(chǎn)生之酵素,但常用于細(xì)胞培養(yǎng)過程中,如:enzymic dissociation of cells,由動物源感染的物質(zhì)是一種危害,尤其是霉?jié){體。霉?jié){體也來自實(shí)驗(yàn)室人員的嘴巴及喉嚨地區(qū)。

 

 

感染的第二個基本風(fēng)險在于過程中使用的器具,特別是培養(yǎng)箱。毫無疑問地,培養(yǎng)箱可以為感染的原始發(fā)生負(fù)起責(zé)任,因?yàn)?它經(jīng)常從外界被引入。雖然如此,因?yàn)橐辛己玫募?xì)胞培養(yǎng)之緣故,所以,必須將有效的保護(hù)機(jī)制放入操作中。故當(dāng)評估各種培養(yǎng)箱系統(tǒng)時,以下所有保護(hù)機(jī)制應(yīng)該列入考慮,如清除培養(yǎng)箱內(nèi)的滋生物方式中,最可靠有效的為:至少維持溫度180?C的加熱滅菌及經(jīng)常能夠把此當(dāng)作必要條件。

 

 

在細(xì)胞成長中很重要的，是藉由箱內(nèi)的大量濕度容量，在二氧化碳培養(yǎng)箱維持等滲壓的滲透壓比例。在過程中，需確保對抗污染的防御力。在此方面特別重要的是乾爽的內(nèi)墻、簡單的清潔及可靠的滅菌。現(xiàn)已采用的有兩道程續(xù)：箱內(nèi)無控制的水箱系統(tǒng)或昂貴、可控制的外部潮濕系統(tǒng)。就兩道手續(xù)而言，各有其利處；故WTB Binder有利地將其結(jié)合成一全新開發(fā)的系統(tǒng)。此新專利的Permadry系統(tǒng)是一具備可控制濕度釋放(可高達(dá)98%相對濕度)的可拆裝雙重水箱系統(tǒng)。此系統(tǒng)很可靠地可除去所有污染危險。

 

 

      培養(yǎng)箱對外最常見的污染途徑包含：排氣風(fēng)扇輪軸,來自外部濕度系統(tǒng)的

流入流出物,測量路徑埠,供氣設(shè)備;無疑地，在箱內(nèi)的循環(huán)風(fēng)扇將被視為所謂的細(xì)菌彈弓(slingshot)，如此一來，在箱內(nèi)中會發(fā)現(xiàn)空氣傳播的細(xì)菌。更進(jìn)一步來說，絕對沒有外部濕度系統(tǒng)流出流入的聯(lián)結(jié)。因?yàn)樵诖吮銜a(chǎn)生最大的污染危險：由于溫度的不同，入口及出口處易產(chǎn)生凝結(jié)。而值得一提的是WTB Binder 二氧化碳培養(yǎng)箱的密閉系統(tǒng)，因唯一外部聯(lián)結(jié)即氣體入口，還是受fine filter的保護(hù)。此外，此密封系統(tǒng)亦有如下優(yōu)異處：極小的系統(tǒng)聯(lián)結(jié)，卻有著極大的穩(wěn)定度和極小的故障率。對使用者來說是非常有親和性的。此一體成型(又稱bath tub)，完全無縫之內(nèi)槽有著類似盆狀圓弧邊緣；這是為何不可能會醞釀細(xì)菌的溫床，且無障礙的落實(shí)完整的清潔及消毒。

 

 

   其他方式包括人為的內(nèi)部消毒,此方法僅在可觸碰到的地帶才有效果, WTB Binder在培養(yǎng)機(jī)制上呈現(xiàn)一種非常進(jìn)步的設(shè)計,采用bathtub原則,整個內(nèi)部能夠簡單地清理及清潔后,不會留下剩馀物,因?yàn)?整個器具,包括基座,可以有彈性地移動。另一方面,有hot-air滅菌的裝置,所以,內(nèi)部元件都不需更動,另一個在cell lines最大感染是由空氣傳播污染的方式,故將不要的濃縮物留在里面,造成細(xì)胞感染。