本文標(biāo)題:"多聚酶濃度一般為0.5-5單位之間-材料顯微鏡"
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多聚酶濃度一般為0.5-5單位之間-材料顯微鏡
嚴格確定引物退火溫度,一般為50-60℃。較高溫度會增強引物與
模板的正確識別和結(jié)合,同時能降低引物3’端不正確核苷酸的錯誤延
伸。但溫度不能過高,過高溫度會破壞引物與模板結(jié)合。
延伸溫度通常約72cC。
(二)多聚酶濃度:一般為0.5-5單位之間。酶量少,合成產(chǎn)物量較
低,酶量高,會造成非特異性產(chǎn)物量增加。
(三)鎂離子:PCR擴增過程中鎂離子濃度應(yīng)保持在0.5-2.5mmol/
L之間。鎂離子濃度可影響引物退火、模板和PCR產(chǎn)物的解離、產(chǎn)物特異
性、引物二聚體生成和酶活性等。
(四)平臺效應(yīng):平臺效應(yīng)是指PER循環(huán)后期,合成產(chǎn)物到達0.3~1
pmol水平時,由于產(chǎn)物的堆積,使原來以指數(shù)增加的擴增速度變緩慢。
導(dǎo)致平臺效應(yīng)因素包括:dNTP或引物等不斷消耗,反應(yīng)物(帥或酶)的穩(wěn)
定性,最終產(chǎn)物(焦磷酸鹽,雙鏈DNA)的阻化作用,非特異性結(jié)合和引
物二聚體參與競爭。
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多聚酶濃度一般為0.5-5單位之間-材料顯微鏡,金相顯微鏡現(xiàn)貨供應(yīng)
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