本文標題："瓊脂培養(yǎng)基常用于將噬菌體或細胞在平板"
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瓊脂培養(yǎng)基常用于將噬菌體或細胞在平板
頂層瓊脂培養(yǎng)基
頂層瓊脂培養(yǎng)基常用于將噬菌體或細胞在平板的表面均勻分布
成一薄層。以1L的批量配制頂層培養(yǎng)基，高壓1 5 min并使之熔化
，冷卻至50℃，輕輕旋轉(zhuǎn)晃動使其混合均勻，分裝至100 ml燒瓶中
。再次高壓，冷卻，于室溫保存。使用前，用水浴或者微波爐熔化
頂層瓊脂，然后冷卻至40一50℃并維持在該溫度。頂層瓊脂中瓊脂
的含量比普通平板要少，如果置于45～50℃溫度，頂層瓊脂可保持
熔化狀態(tài)數(shù)天。質(zhì)粒圖譜
質(zhì)粒在所有的細菌類群中都可發(fā)現(xiàn)，它們是獨立于細菌染色體
外自我復(fù)制的DNA分子。自然界中，質(zhì)粒是在營養(yǎng)充足時出現(xiàn)，它
在結(jié)構(gòu)，大小，復(fù)制方式，每個細菌的拷貝數(shù)，在不同的細菌體內(nèi)
的繁殖力，在菌種之間的轉(zhuǎn)移力等方面都會變化，可能最重要的是
質(zhì)粒所攜帶的特征的改變。大多數(shù)原核生物的質(zhì)粒是雙鏈環(huán)狀的DN
A分子；但是無論是在革蘭氏陽性還是陰性菌體內(nèi)都可發(fā)現(xiàn)線狀質(zhì)
粒。質(zhì)粒大小變化很大，可從幾個到數(shù)百個kb。質(zhì)粒依靠宿主細胞
提供的蛋白質(zhì)進行復(fù)制，但也可使宿主細胞獲得質(zhì)粒編碼的功能。
質(zhì)粒復(fù)制可以與細菌的細胞周期同步，導(dǎo)致菌體內(nèi)質(zhì)粒的拷貝數(shù)較
低，質(zhì)粒復(fù)制也可獨立于細胞周期，使每個菌體內(nèi)擴增了成百上千
個質(zhì)粒拷貝。一些質(zhì)粒在菌種間可自由地轉(zhuǎn)移它們的DNA分子，另
一些只轉(zhuǎn)移質(zhì)粒給同種細菌，而有些卻根本不轉(zhuǎn)移它們的DNA。質(zhì)
粒帶有具有許多功能的基因，這些功能包括對抗生素和重金屬的抗
性，對誘變原的敏感性，對噬菌體的易感或抗性，產(chǎn)生限制酶，產(chǎn)
生稀有的氨基酸和毒素，決定毒力，降解復(fù)雜有機分子，以及形成
共生關(guān)系的能力和在生物界內(nèi)轉(zhuǎn)移DNA的能力。
所有的質(zhì)粒載體都有三個共同的特征：一個復(fù)制子，一個選擇
性標志和一個克隆位點。復(fù)制子是含有DNA復(fù)制起始位點的一段DNA
(ori)，也包括表達由質(zhì)粒編碼的復(fù)制必需的RNAs和蛋白質(zhì)的基因
。選擇性標志對于質(zhì)粒在細胞內(nèi)持續(xù)存在是必不可少的，通常是顯
性的，并且往往是編碼對某個抗生素有抗性的基因。克隆位點是限
制性核酸內(nèi)切酶切割位點，外源性DNA可由此插入質(zhì)粒內(nèi)，而并不
影響質(zhì)粒的復(fù)制能力，或為宿主提供選擇性表型。載體發(fā)展的趨勢
是單一載體具有多個特征。
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